Палімеразнай ланцуговая рэакцыя, скарочанаПЦРна англійскай мове - гэта метад малекулярнай біялогіі, які выкарыстоўваецца для ампліфікацыі пэўных фрагментаў ДНК.Гэта можна разглядаць як спецыяльную рэплікацыю ДНК па-за арганізмам, якая можа значна павялічыць вельмі невялікую колькасць ДНК.На працягу ўсягоПЦРУ працэсе рэакцыі важную ролю адыгрывае адзін клас рэчываў – ферменты.
1. Taq ДНК
У эксперыментах у першыя дні стПЦР, навукоўцы выкарысталі ДНК-палімеразу I кішачнай палачкі. Але з гэтым ферментам ёсць праблема: яму трэба папаўняць новы фермент кожны раз, калі выконваецца цыкл, што робіць этапы аперацыі трохі складанымі і яго цяжка цалкам аўтаматычна ўзмацніць.Гэтая праблема была вырашана пасля таго, як у 1988 г. навукоўцы выпадкова вылучылі ДНК-палімеразу Taq з Thermus aquaticus. З таго часу аўтаматычная ампліфікацыя ДНК стала рэальнасцю.Адкрыццё гэтага фермента таксама робіцьПЦРтэхналогія зручная, практычная і універсальная тэхніка.У цяперашні час ДНК-палімераза Taq з'яўляецца найбольш распаўсюджанай палімеразай у наборах ДНК.
2. ПфуДНК
Як згадвалася вышэй, ДНКаза Taq мае вялікую памылку, таму навукоўцы ў пэўнай ступені змянілі ДНК-палімеразу Taq, каб пазбегнуць неспецыфічнай ампліфікацыі з-за неадпаведнасці, што прыводзіць да недакладных вынікаў тэсту.Але мадыфікацыя Taq ДНК-полимеразы можа душыць актыўнасць ДНК-полимеразы пры пакаёвай тэмпературы.PfuДНК-палімераза цалкам можа кампенсаваць вышэйпералічаныя недахопы Taq ДНК-палімеразы, так што рэакцыя ПЦР можа быць праведзена нармальна, і ўзровень паспяховасці ампліфікацыі гена-мішэні можа быць эфектыўна палепшаны.
3. Зваротная транскриптаза
Зваротная транскрыптаза была адкрыта ў 1970 г. Гэты фермент выкарыстоўвае РНК у якасці матрыцы, dNTP у якасці субстрата, прытрымліваецца прынцыпу спарвання асноў і сінтэзуе адну нітку ДНК, камплементарную матрыцы РНК у напрамку 5'-3'.Зваротная транскрыптаза ў асноўным залежыць ад актыўнасці ДНК-палімеразы з ДНК або РНК-матрыц і таму не мае 3'-5' экзануклеазнай актыўнасці.Аднак ён валодае актыўнасцю РНКазы Н, якая ў пэўнай ступені абмяжоўвае даўжыню сінтэзу зваротнай транскрыптазы.З-за нізкай дакладнасці і тэрмастабільнасці дзікай зваротнай транскрыптазы навукоўцы таксама яе мадыфікавалі.
ДляПЦРэксперыменты, асноўныя расходныя матэрыялы: індывідуальная прабірка для ПЦР, прабірка для ПЦР на 4/8 палосак, пласціны для ПЦР.
ЛабіёРасходныя матэрыялы для ПЦРёсць наступнаеперавагі:
ПЦР пласціны: Шырокая сумяшчальнасць термоциклера;Высокая кантраснасць, лёгкая ідэнтыфікацыя свідравіны;добра флуарэсцэнтнае адлюстраванне;добраецеплаабмен;Сертыфікаваныя інгібітары ДНКазы, РНКазы, ДНК, ПЦР і правераны на апіраген.
Індывідуальныя прабіркі для ПЦР: Устойлівы да выпарэння; добрыцеплаабмен;выдатная аптычная празрыстасць; сертыфікаваныя інгібітары ДНКазы, РНКазы, ДНК, ПЦР і правераны на апірагеннасць.
Прабіркі для ПЦР на 4/8 палосак: Ультратонкія сценкі; высокая выразнасць; добрае адлюстраванне флуарэсцэнцыі;можа выкарыстоўвацца ў фармацэўтычнай прамысловасці, харчовай прамысловасці і малекулярнай біялогіі; высакаякасны, некрануты PP матэрыял; сертыфікаваныя інгібітары ДНКазы, РНКазы, ДНК, ПЦР і правераны на апіраген.
Час публікацыі: 9 чэрвеня 2023 г